Колонка ВЭЖХ является основным элементом в хроматографии, поскольку именно она осуществляет разделение аналитов в образце. Защита колонки и уход за ней гарантирует не только надежные результаты, но и бесперебойную работу. Все мы знаем, что срок службы колонки для ВЭЖХ ограничен, но как обеспечить максимальный срок службы?

Чтобы ответить на этот вопрос, сначала рассмотрим возможные причины блокирования потока через колонку.

Образец:

Образцы, вводимые в колонку для ВЭЖХ, часто бывают разнообразными и сложными. Эти образцы содержат много компонентов, которые могут быть нестабильны в условиях метода ВЭЖХ. Ввод таких образцов без надлежащей подготовки / предварительной обработки образцов может привести к засорению колонки.

Остаточные белки и высокогидрофобные соединения, такие как липиды, также могут не вымываться полностью во время обращенно-фазового разделения, они имеют тенденцию медленно адсорбироваться на колонке и вызывать проблемы.

Несовместимость разбавителя образца и подвижной фазы:

Если разбавитель пробы несовместим с подвижной фазой, тогда, когда проба вводится в подвижную фазу, существует вероятность осаждения пробы. Это часто наблюдается, если разбавители слишком полярны или слишком неполярны по сравнению с подвижной фазой.

Буферы подвижной фазы:

Буферы иногда используются в составе подвижной фазы в ВЭЖХ. Иногда из-за разницы температур в лаборатории некоторые компоненты буфера имеют тенденцию к выпадению в осадок. Использование слишком высокой концентрации буфера также приводит к выпадению осадка. Перед использованием эти буферные соли необходимо отфильтровать.

Фрагменты изношенных уплотнений:

Уплотнения насоса и уплотнения кранов ввода часто изготавливаются из резины или пластика. Из-за нормального износа эти компоненты могут образовывать загрязнения в жидкостном тракте. Если не проводить периодическое обслуживание насосов и портов инжектора, мусор может

Лучшим способом защиты колонок ВЭЖХ (аналитических и препаративных) от загрязнения, например, твердыми частицами, неотфильтрованными компонентами подвижной фазы или фрагментами от изношенных уплотнений является использование защитной колонки.

Защитная колонка - это, по сути, мини-колонка, заполненная таким же носителем, что и аналитическая колонка, она устанавливается перед аналитической колонкой. Эти предколонки бывают разных размеров, чтобы соответствовать параметрам собственно колонок. Фритта в защитных колонках такая же, как и в аналитической колонке. Это означает, что все, что потенциально может заблокировать аналитическую колонку, будет задержано защитной колонкой. Затем это препятствие можно устранить, просто заменив защитные картриджи, тем самым продлевая срок службы аналитической колонки.

При незащищенной колонке последовательные инъекции загрязненного образца приводят к устойчивому и необратимому увеличению противодавления. Без защиты колонки рост противодавления становится экспоненциальным. Это увеличение противодавления в конечном итоге приведет к ухудшению параметров разделения , включая уширение полос и, возможно, расщепление пиков. В результате это также может отрицательно повлиять на чувствительность метода, количественное определение и идентификацию пиков.

Однако срок службы столбца значительно увеличиватеся за счет использования предколонки. В этом случае последовательные вводы образца по-прежнему приводят к увеличению давления, но это происходит из-за того, что частицы улавливаются в защитной колонке, а не в колонке УВЭЖХ / ВЭЖХ. Таким образом, простой заменой картриджа предколонки через регулярные промежутки времени, противодавление возвращается к начальному уровню, а эффективный срок службы колонки значительно увеличивается.

Когда следует заменить картриджи?

Следует регулярно визуально осматривать поверхность картриджа, не нарушая наружного слоя. При этом легко контролировать визуальное накопление загрязнений и менять защитный картридж вовремя. Если загрязнители бесцветны, следует заменять картридж так часто, как это необходимо для поддержания хроматографических характеристик (например, когда разрешение уменьшается на 10% и / или когда эффективность / ширина пиков уменьшается на 20%) или если противодавление в системе увеличивается более чем на 20%.

На какие особенности следует обратить внимание при покупке защитной колонки?

Материал носителя (неподвижная фаза) защитного картриджа должен быть таким же, как и у аналитической колонки, чтобы не происходило изменения селективности.

Внутренний диаметр защитного картриджа должен быть таким же, как внутренний диаметр аналитической колонки, чтобы свести к минимуму дополнительно уширение пика. Идеально использовать защитную колонку модели(идентификатора), наиболее близкой к модели колонки.

Длина защитной колонки должна быть минимальной, чтобы избежать дополнительных мертвых объемов.